Ветеринарная Энциклопедия

www.webvet.ru


ИСКАТЬ НА OZON.RU


КАТАЛОГ КОМПАНИЙ ТЕЛЕФОННАЯ ВЕТПОМОЩЬ СТАТЬ ПАРТНЁРОМ ПОДПИСАТЬСЯ КОНТАКТЫ

Энциклопедия болезней животных


Болезни животных - По причине - Заразные болезни - Инфекционные - Инфекционный ларинготрахеит птиц




Инфекционный ларинготрахеит птиц


 Инфекционный ларинготрахеит птиц (ИЛТ) Infectiose Laryngotracheitis des Huhnes (нем.),Infections laryngotracheitis(aнг.), Laryngotracheite infectieuse (франц.) - это  вирусная контагиозаная респираторная болезнь поражающая кур, индеек, фазанов Впервые описан в 1925 г Мей и Титслер под названием инфекционный бронхит С 1931г ее стали именовать инфекционным ларинготрахеитом. Ре­гистрируется во всех странах мира, где развито промышленное птицеводство.

Сведения о возбудителе. Вирус впервые выделил Бичь в 1930 г в США

Морфология и химический состав. Геном вируса ИЛТ имеет длину 155 тыс пни состоит из длинной уникальной последовательности 1Д (120 тыс пн) и короткой уникальной последовательности Us (17 тыс п н ). Гликопротеины вируса ИЛТ были выделены из экстрактов вирусинфицированных клеток и очищены с помощью лектин-аффинной хроматографии Гликопротеины предохраняли 83 % птиц от заражения их патогенным вирусом. Гликопротеин В (gB) является первым структурным белком вируса ИЛТ птиц Клонирован, секвенирован ген этого белка.

Устойчивость. Вирус чувствителен к липолитическим агентам,теплу и различным де-зинфектантам Он длительно сохраняет свою активность влиофилизированном состоянии или при - 20-60°С Температура 55°С разрушает вирус в течение 10-15 мин, а 38°С - за 48 ч В вируссодержащей трахеальной слизи больного цыпленка вирус разрушается в течение 44 ч при температуре 37°С, а в ХАО при 25°С в течение 5 ч В патологическом материале (трахее от больных кур)при температуре - 8-10°С он сохранялся более 370 дн В заморо­женных тушках больных и вынуждено убитых кур, хранившихся при температуре - 10, 18, 28°С ,вирус оставался активным более 19 мес, на поверхности скорлупы в условиях термо­статаин активируется через 12 ч, а в зараженных птичниках сохраняется не более 9 дн Пол­ностью инактивируется в 1 %-ном растворе креола в течение 30 с %

АГ вариабельность и родство. Все птичьи герпесвирусы на основании перекрестной РН сгруппированы в 11 разных групп. Штаммы вируса ИЛТ различаются по вирулент­ности для птиц и КЭ, тропизму, скорости выделения из клеток в тканевой культуре, устой­чивости при хранении, авидности,молекулярно-структурными особенностями Иммунологических различий среди штаммов вируса ларинготрахеита не обнаружено, хотя некоторые отклонения в способности нейтрализоваться гипериммунными сыворотками описаны у штаммов различной вирулентности.

Локализация вируса. Вирус обнаруживают главным образом вдыхательных путях, в меньшем количестве в печени и селезенке. При интратрахеальном заражении 30 дневных цыплят его выделяли из трахеи и носовых ходов 7 дн, при ректальном заражении находили в фабрициевой сумке и трахее в течение 3 дн. У птиц-реконвалесцентов установлено длительное вирусоносительство. Из трахеи переболевших птиц вирус выделяли 2 дня. Послеострой фазы ИЛТ может наступить латентный период с сохранением генетического материала вируса в ДНК клеток ганглия тройничного нерва. При различных воздействиях может произойти ре­активация инфекции с выделением вируса во внешнюю среду.

АГ активность. ВНА у зараженных кур появляются со 2-3 недели после заражения, титр их достигает максимума к 5-му дню и сохраняется до 8-21 месяцев.

Экспериментальная инфекция. Заразить восприимчивую птицу легко путем апплика­ции вируссодержащего материала на слизистую оболочку гортани, трахеи, глаз, носа, под­глазничного синуса и клоаки. На 6-12 дн у зараженных цыплят развиваются типичные сим­птомы болезни. На 3-10 дн после внутри трахеальной инокуляции вируса у кур-несушек от­мечаются признаки умеренного респираторного заболевания. На 4-й дн в ткани трахеи и но­совой полости обнаруживается вирус. В период между 19 и 59 дн после заражения с помо­щью ЦПР периодически выявляется вирус. Ганглии тройничного нерва являются основным местом локализации вируса. У экспериментально зараженных СПФ-цыплят вакцин­ным шт. SA-2 вируса ИЛТ вирусный АГ в трахеальных смывах определялся до 7-го дн по­сле заражения, a AT против вируса в трахеальных смывах с 5-го дн после заражения. Иммуноглобулины класса А появлялись на 6-й день после заражения, а ВНА - только на 14 день. Вирус вызывал заболевания у индеек в возрасте 3-4 нед и 2-10 мес. Больные ин­дейки могут быть источником заражения кур. Данные о восприимчивости голубей к вирусу противоречивы Павлины и фазаны оказались чувствительными к вирусу, причем чувствительность фазанов была выше Кролики, морские свинки и белые крысы резистентны.

Вирусовыделение. В экспериментальных условиях инфицированные птицы начинают экскретировать вирус через 8 дней после заражения Прединфекционный период может длить­ся 2 дня, а выделение вируса наблюдалось в течение 6 дн. Клинические признаки у заражен­ной птицы обычно появляются на 6 дн. В организме переболевших птиц вирус ИЛТ, как и многие другие герпесвирусы, может находиться в латентной форме. Полевые штаммы ,как и вакцинные обладают свойством персистировать в нервной системе. Вакцинный вирус легко передается горизонтально. Поэтому при применении вакцины лучше иммунизировать всех цыплят птицефермы.

Культивирование. Вирус культивируется на ХАО эмбрионов кур,уток, индеек, неко­торых первичных и перевиваемых культурах клеток, неразвивается в эмбрионах голубей и морских птиц. На ХАО образуются фокусные поражения 2 типов крупноузелковые с непро­зрачной белой периферией инекротическим центром и мелкоузелковые - без некроза. Узел­ковые поражения появляются на всей поверхности ХАО, а очаговые только на месте иноку­ляциивируса. В зараженных клетках ХАО образуются внутриядерные включения, а иногда гигантские клетки. В культурах линий СПЭВ, FJ, клеток фибробластов куриных эмбрионов, почки цыплят, утят, эмбрионов свиньи, новорожденных крольчат вирус вызывает к 3-4 дн ЦПИ, характеризующиеся округлением и зернистостью клеток, лизисом их с по­следующим отторжением. В клетках СПЭВ формируются цитоплазматические включения и образуются многоядерные клетки. Внутриклеточные включения обнаруживаются через 12 ч и к 30-36 ч после заражения достигают наивысшей концентрации. В инфицированных куль­турах клеток вирус вызывает образование бляшек.

ГА свойства. Вирус, репродуцированный в КЭ, не обладает ГА активностью Она про­является иногда в случае культивирования вируса в первичной культуре почки цыплят.

Эпизоотологическая характеристика. Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции -больная и переболев­шая ИЛТ птица, которая длительное время (свыше 2 лет)остается вирусоносителем. Вирус от больных птиц можно выделить в течение 7 дн после появления симптомов болезни, после чего отдельные переболевшие птицы остаются вирусоносителями и периодически выделяют вирус, не обязательно при этом с переходом болезни в клиническую форму. Инфицирование может происходить и половым путем. Возможна передача вируса через зараженную скорлу­пу яйца. В условиях инкубатора вирус сохраняет инфекционность до 96 часов. После обработки яиц парами формальдегида он погибает через 40 минут. После острой фазы инфекции может наступить латентный период с сохранением генетического материала вируса в ДНК клеток ганглия тройничного нерва. При различных воздействиях может произойти реактивация инфекции с выделением вируса во внешнюю среду. Благоприятным фактором в плане иско­ренения инфекции в птицеводческих хозяйствах являются высокая степень видоспецифичности вируса, необходимость тесного контакта кур для распространения инфекции, быстрая инактивация вируса вне организма птиц,генетическая стабильность вируса, отсутствие раз­множения вируса в трахее при наличии местного специфического клеточно-опосредованного иммунитета.

Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях вирус по­ражает кур всех возрастов Фазаны и индейки также чувствительны к вирусу ИЛТ

Клинические признаки и патологоанатомические изменения.Инкубационный пе­риод колеблется от 2 до 30 дней. Длительность его зависит от вирулентности, дозы вируса, метода введения в организм и физиологического состояния птицы. Наиболее короткий ин­кубационный период , равный 40 ч , отмечен при интратрахеальном заражении. Болезнь протекает сверхостро, остро и хронически. Различают легкую и атипичную формы болезни, а по локализации поражений -ларинготрахеальную и конъюнктивальную формы. Первая обычно протекает остро и сопровождается кашлем, удушьем, хрипом при дыхании. Катаральное или фибринозное воспаление слизистых оболочек можно наблюдать в носовой полости иинфраорбитальных синусах Слизистая оболочка в этих случаях гиперемирована набухшая, иногда пронизана мелкими точечными кровоизлияниями. В ротовой полостина слизистой оболочке можно находить легко отделяемые налеты беловатого цвета локали­зующиеся у корня языка, в углах клюва, окружности неба и у входа в гортань и глотку В ряде случаев отмечают катаральный фарингит На вскрытии изменения находят главным образом в гортани и трахее. В просвете гортани обнаруживают казеозную пробку. После ее удаления слизистая оболочка гортанинеровная, красноватая, отечная, утолщенная. Конъюнктивальная форма чаще наблюдается у цыплят и характеризуется катаральным или фиб­ринозным конъюнктивитом. Эта форма может протекать только с поражением конъюнкти­вы или в сочетании с ларинготрахеальной формой болезни У части птиц отмечают отек век,особенно нижнего У некоторых кур и цыплят развивается фибринозное воспаление конъюнктивы с отложением в конъюнктивальный мешок фибринозно-казеозных масс склеиванием век, помутнением роговицы, иногда с развитием панофтальмита. Изменения в легких при ИЛТ находят обычно у небольшого количества птиц. В некоторых случаях они ограничиваются только бронхами, в которых развивается катаральное, реже фибринозное воспаление, иногда в просвете бронхов обнаруживают сгустки крови или фибринозно-казеозные пробки.

Более характерные признаки ИЛТ отмечаются у цыплят-бройлеров в возрасте 4-7 нед и у кур-несушек в возрасте 18-76 нед. В ряде случае водно временно с бронхитом выявляют катаральную пневмонию в виде небольших сероватых уплотненных участков, иногда с мел­кими очагами некроза желтоватого цвета Поражение воздухоносных мешков встречается сравнительно редко Однако при экспериментальном воспроизведении инфекции, особенно при интратрахеальном методе заражения, аэросаккулит часто находят у значительного ко­личества птиц. Стенка воздухоносных мешков при очаговом или диффузном поражении утолщена,частично или полностью непрозрачные сосуды ее переполнены кровью. В полос­ти воздухоносных мешков находят серозный пенистый экссудат со сгустками фибринаили зернами фибринозно-казеозных масс В эпителиальных клетках трахеи уже через 12ч после заражения находят внутриядерные включения типа А. При обычном окрашивании они представляются однородными, а при серебрении выявляются аргининофильные гранулы.

При ларинготрахеальной форме болезни характерные изменения отмечают в гортани и трахее. Слизистая оболочка этих органов гиперемирована, отечна, эрозирована, с кровоизлияниями, а просвет их часто бывает заполнен катаральным или катарально-геморрагическим экссудатом. В большинстве случаев в гортани находят фибринозно-казеозные массы, закупоривающие просвет. При некоторых энзоотиях обнаруживают катаральное вос­паление слизистых оболочекносовой и ротовой полостей, а на корне и уздечке языка фиб­ринозные наложения.У некоторых кур наблюдают увеличение селезенки, катаральное вос­паление тонкого кишечника, фабрициевой сумки и клоаки. В бронхах и легких поражения встречаются редко, в виде катаральной бронхопневмонии. При конъюктивальной форме от­мечают серозный или фибринозный конъюнктивит с отложением в конъюнктивальный ме­шокказеозных масс, помутнение роговицы и поражение глазного яблока.

Гистологические изменения. Соответствуют картине вскрытия. В гортани и трахее находят серозно-катаральное или фибринозно-геморрагическое воспаление слизистой обо­лочки. В начале болезни выявляют гиперемию сосудов, дистрофию покровного эпителия и отек слизистой оболочки, в более поздние сроки некроз и десквамация респираторного эпи­телия, инфильтрацию слизистой оболочки или мфоидно-гистиоцитарными элементами и пе-риваскуяярные кровоизлияния. В отдельных участках слизистая бывает некротизирована до хрящевого кольца. Вирус размножается в эпителиальных клетках слизистой оболочки гор­тани, трахеи,конъюнктивы, легких, воздухоносных мешков, клоаки и народу с воспалительной реакцией образует внутриядерные включения. Включения обнаруживают до насту­пления некроза эпителия между 1-5-м дн после заражения. Форма их округлая, овальная или продолговатая, количество в одре 1-4 , окружены светлым ободком. Описано спонтан­ное массовое некротическое поражение тимуса, фабрициевой сумки и селезенки у 40-дн цы­плят-бройлеров с признаками анемии. При вскрытии обнаружено уменьшение размера ти­муса и фабрициевой сумки, которые имели темно-желтый или коричневый цвет, отмечалась также диффузная аденоэктазия железистого желудка.При гистологическом исследовании наблюдали очаги фибрино-гнойного воспаления инекроза в тимусе, фабрициевой сумке и селезенке В гистиоцитах и лимфоцитах этих органов обнаружены одиночные крупные внутриядерные тельца-включения. С помощью трансмиссионной электронной микроскопии в набухших ядрах с периферическим расположением хроматина гистиоцитов тимуса зафик­сировано наличие герпесвирусных частиц. При остром течении болезни вирус ИЛТ в 85-86% случаев обнаруживали в инфицированных клетках трахеи и гортани, в 80-88 % - в инфицированных клетках крупных бронхов и лишь в 60 - 62 % - в инфицированных клетках мелких бронхов и бронхиол. Вирус ИЛТ в 76-84 % случаев удается выделить из смывов но­соглотки,гортани и трахеи. При подостром и хроническом течениях положительные ре­зультатыполучали при исследовании инфицированных клеток гортани и трахеи (96 %),бронхов и бронхиол (85 %), смывов носоглотки, гортани, трахеи (72-86 %), ЖКТ(до 60%) и печени (8-12%). Таким образом при хроническом течении болезни положительные резуль­таты по выделению вируса ИЛТ выше, чем при его остром течении, исключая печень. Тем самым диагностическая надежность метода вирусовыделения при исследовании органов птиц с разной степенью выраженности патологических изменений составляет от 85 % (при остром течении) до 96% (приподостром и хроническом течении заболевания). Однако ме­тод вирусовыделения,обладая высокой специфичностью имеет существенный недостаток - значительная продолжительность во времени (до 45-52 дн).

Патогенез. Вирус проникает в организм через конъюнктиву, носовую или ротовую полости и репродуцируется в эпителиальных клетках слизистой оболочки гортани и трахеи,вызывая серозно-катаральное воспаление и образование внутриядерных включений. Впо­раженных эпителиальных клетках происходит быстрое размножение ядер безделения цито­плазмы. Через 24 ч из мест поражения вирус поступает в кровеносную систему. На этой ста­дии заболевания обнаруживают дистрофию, некроз и десквамацию эпителия слизистой обо­лочки респираторного тракта, а в просвете трахеи слизистой экссудат с примесью крови. При дальнейшем течении болезни поражения слизистой гортани и трахеи усиливаются не только самим действием вируса, но и в результате происходящих в ней дистрофических изменений.Отмечают сужение просвета дыхательных путей, а часто и образование казеозных пробок, что приводит к полной их закупорке и птица погибает от асфиксии.

Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, клинических признаков бо­лезни, и результатов лабораторных исследований. Часто болезнь протекает атипично, ха­рактерные признаки ее слабо выражены или их нет. В таких случаях решающее значение в диагностике приобретают лабораторные методы исследования.

Выделение вируса. Взятие и подготовка материала. Для вирусологического исследования от больных птиц берут экссудат из трахеи, отпавших или вынужденно убитых в начальной фазе болез­ни между 2-7 дн - слизистые оболочки гортани, трахеи, конъюнктивы, носовых ходов и ку­сочки легких. Материал замораживают и сохраняют при - 20°С и ниже. Для гистологиче­ских исследований материал помещают в 10%-ный раствор нейтрального формалина. Из патологического материала готовят суспензию 1 5 на растворе Хенкса или изотоническом растворе NaС1, центрифугируют при 1500-2000 мин 1 в течение 15мин, к надосадочной жидкости добавляют по 1000 ЕД пенициллина и 500 мкг стрептомицина в расчете на 1 мл выдерживают в течение 3-8 ч при 2-4°С. Затемиспользуют для инокуляции КЭ, культуры клеток или не иммунных к ИЛТ цыплят

Заражение КЭ. Для каждой пробы используют по 10 эмбрионов в9-12 да возраста. За­ражают на ХАО Погибших в первые 24 ч после инокуляции эмбрионов не учитывают Ос­тавшихся живых эмбрионов на 6-8-й дн убивают.Макроскопические изменения ХАО появ­ляются через 2,5-3 сут и достигают максимума к 5-6 дн. Штаммы вируса ИЛТ вызывают мелкоузелковые и очаговые поражения ХАО. Узелковые поражения обнаруживаются по всей поверхности ХАО,очаговые - только на месте инокуляции вируса. Необходимо учиты­вать, что не все штаммы вызывают гибель куриных эмбрионов на 4-6- дн. Для выявления специфических поражений надо провести не менее 3 пассажей, используя ХАО, суспендированную в аллантоисной жидкости предыдущего пассажа.

Выделение вируса надо подтвердить обнаружением телец-включений Зейфрида, РН, РДП,биопробой, а также ИФ и ЭМ.

Заражение культур клеток. Наиболее пригодны в данном случае культуры клеток по­чек эмбриона и цыплят, в которых первые изменения наблюдаются иногда уже через 24 ч после заражения, а через 48-72 ч в клеточной культуре обнаруживаются многоядерные ги­гантские клетки, в которых можно обнаружить внутриядерные включения. Специфичность этих изменений доказывают ИФ или РН. Наблюдение за культурой клеток проводят до 6-7 дн Для первичного выделения вируса так же пригодны клетки Vero

Индикация и идентификация вируса

Обнаружение специфических телец-включений. Вирус ИЛТ размножается в эпите­лиальных клетках слизистой оболочки гортани, трахеи,клоаки, вызывая острое воспаление этих оболочек с образованием внутриядерных включений. Включения обнаруживаются до наступления некроза эпителия между 1-м и5-м дн после интратрахеального заражения цы­плят. В мазках из конъюнктивы включения находят через 48 ч после заражения. Ядро, со­держащее включение,обычно увеличено, отмечается гиперхроматия ядерной оболочки. Включения имеют округлую форму, иногда форму диплококков и занимают 1/2 -1/3 кле­точного ядра.Вокруг включения видна неокрашенная зона, что считается характерным. Бо­лезнь можно диагностировать на основании обнаружения внутри ядерных включений. Для этого на предметных стеклах готовят мазки из соскобов эпителия слизистой оболочки, фик­сируют в абсолютном метиловом спирте в течение 3-5 мин окрашивают раствором краски Гимза (1капля краски на 1 мл дистиллированной воды) в течение 2 ч при 37°С, затем мазки промывают, обрабатывают абсолютным метиловым спиртом,снова промывают, высуши­вают и просматривают. В положительных случаях цитоплазма эпителиальных клеток окра­шивается в бледно-голубой цвет, ядерные оболочки таких клеток более темные, внутриядер­ные включения четко видны,светло- красного цвета, по форме варьируют (шарообразные или колбасовидные),окружены ясно видимыми светлыми ободками. Количество их в ядре от 1 до 4.Указанный метод позволяет иногда в течение 3-4 ч диагностировать ИЛТ даже при атипичном проявлении. Вероятность обнаружения телец-включений в патологическом материале существует только в начальной фазе болезни - между 2-7 дн.

ИФ. Позволяет обнаружить вирусный АГ при помощи специфической флюоресцирую­щей сыворотки в мазках из слизистой оболочки трахеи,конъюнктивы от больных цыплят (в период острого течения болезни), из пораженной ХАО и инфицированных культур клеток. Реакцию ставят по общепринятой методике.Чаще используют прямой метод. Положитель­ную ИФ в мазках от больной птицы наблюдают в период острого течения болезни, когда обнаруживаются внутриядерные включения и можно выделить вирус на КЭ.

Биопроба. Ставят ее на цыплятах 30-90- дн возраста путем аппликации вируссодержащего материала на слизистую оболочку гортани, трахеи,глаз, носа, подглазничного синуса, клоаки. При наличии вируса в исследуемом материале у зараженных цыплят на 6-12 дн раз­виваются типичные клинические признаки экспериментальной инфекции. При инокуляции материала в подглазничный синус в положительных случаях развивается синусит с отеком, выделениями из носовых ходов и слезотечением. Положительная реакция на клоачную про­бу проявляется с 3-го по 8-й дн, но чаще на 4-5 дн в виде отечности слизистой оболочки - фабрициевой сумки и катарального, геморрагического или фибринозного воспаления.

Наблюдение за зараженными цыплятами ведут до 14 дней. Чаще всего заражение проводят на слизистую оболочку трахеи и клоаки, так как этот метод позволяет определить виру­лентность штамма, а также провести дифференциацию от вирусов, вызывающих сходное поражение ХАО у инфицированных КЭ. При интратрахеальном заражении 4-нед цыплят вирулентным штаммом CS-1 вируса ИЛТ. Наибольший титр вируса в тканях трахеи (106 БОЕ/г) установлен на 2-4-е сут. Позднее количество вируса резко снижалось и на 7 дн его не обнаруживали,хотя антиген вируса в эпителии трахеи и в большом количестве выявляли еще на7-8 сут с помощью ИФ.

Последнее время естественные инфекции все чаще протекают нетипично, абортивно, хронически или даже бессимптомно. Выделяемые штаммы также менее патогенны для КЭ, не всегда приводят к их гибели и даже не всегда вызывают патологические изменения на слизистых оболочках при непосредственном ведении исследуемого материала.

РН. Реакцию ставят по общепринятой методике. Чаще всего в диагностической практи­ке используют метод: - разведение вируса и постоянная доза сыворотки. Результаты РН вы­ражают в индексах нейтрализации. Принято индексы нейтрализации от 1 до 9 считать отри­цательными, от 10 до 49 -сомнительными, от 50 и выше - положительными. РН можно про­водить и в культуре клеток ПЭК и 3-8 дн цыплятах.

РДП. Для идентификации возбудителя в РДП используют набор куриных антисыворо­ток, полученных к различным вирусам птиц. РДП ставят по общепринятой методике. Для РДП при диагностике ИЛТ птиц 1,5%-ный агаровый гельготовят на верональном буферном растворе с рН 7,2 следующим образом: в 100 мл горячей дистиллированной воды растворя­ют 1,84 г веронала, после охлаждения доливают дистиллированной водой до 1000 мл и рас­творяют в полученном растворе 10,3 г мединала. Раствор хранят при 4°С. Реакция проста по технике выполнения и позволяет выявлять примерно 75% положительных случаев, установ­ленных при помощи заражения эмбрионов. РДП специфична, но недостаточно чувствитель­на, ее используют главным образом для ретроспективной диагностики среди взрослых кур.

Приготовление гипериммунных сывороток и антигенов.Гипериммунные вирус-нейтрализующие сыворотки получают на кроликах по следующей схеме. Вирус (суспензии ХАО 1:10 после центрифугирования при 2500 мин 1 в течение 30 мин) вводят кроликам внутривенно в течение 3 нед по 3 раза в неделю(через 1 дн): в первую нед - по 2 мл, во вто­рую - по 3, в третью - по 4 мл.Через 7 нед после первичной иммунизации кролику внутрибрюшинно инъецируют 10 мл вируса, а на следующий день - 15 мл внутривенно. Через 7 дн после последнего введения АГ кроликов обескровливают. Гипериммунные кроличьи сыворотки используют в РН для типирования вируса ИЛТ.

Получение гипериммунных преципитирующих сывороток на птице. Центрифугированную суспензию вируссодержащей ХАО в разведении 110 вводят взрослым петухам в подкрыльцовую вену в объеме 1-2 мл по схеме 4 инъекции с промежутками в 1 день, 7 дн отдыха, 4 инъекции с промежутками в 1 день. На 6-йдн после последней инъекции пробно берут кровь из сердца, в случае неактивности сыворотки проводят трехкратное введение вируса с суточными интервалами, на 6-ой день вторично берут пробу крови. Установлено что препараты очищенного вируса ИЛТ, полученные в градиенте плотности глицерин-тартрата,более пригодны для выделения вирионной ДНК, тогда как препараты, очищенные в перколе, лучше использовать в качестве специфического АГ для ИФА и получения специфических сывороток. По данным ЭМ препараты вируса ИЛТ, очищенные в перколе, практически не содержат примесей клеточных компонентов (везикул).

Идентификация вируса с помощью мон АТ. По чувствительности ИФА с мон АТ со­поставим с методом выделения вируса, но более быстрым и более чувствительным по срав­нению с ИФ В ИФА используют кроличьи поликлональные AT и мышиные мон АТ.

Серодиагностика и ретроспективная диагностика. В нетипичных случаях, особенно при хроническом течении инфекции, провести диагностику позволяет установление роста титра антител при исследовании парных сывороток.Однако такого рода исследования про­водятся главным образом с целью получения данных, свидетельствующих о перенесении заболевания данной популяцией и указывающих на степень распространенности возбудите­ля на определенной территории. Пробы сыворотки от птицы исследуют дважды - через 14-28 дн интервал. Повышение титра антител к вирусу и числа положительно реагирующих птиц в стаде свидетельствует о наличии и распространении инфекции в хозяйстве,а сохра­нение или снижение уровня AT - о прошедшей инфекции. Для серологического исследова­ния кровь берут на 14-28-й дн от начала болезни не менее чем от 5-10 птиц по 5 мл от каж­дой. До начала исследования сыворотку сохраняют в замороженном состоянии при минус 20-70°С. Сыворотки больных и переболевших птиц, а также контрольные инактивируют при 56°С 30 мин.

Приготовление антигенов для РН и РДП. ХАО КЭ с характерными для данного ви­руса поражениями гомогенизируют с равным количеством буферного изотонического рас­твора с рН 7,2-7,4, к которому добавлены антибиотики из расчета по 100 ЕД пенициллина и стрептомицина на 1 мл раствора. Суспензию Центрифугируют при 3000 мин 1 20 мин. Надо садочную жидкость сливают и используют в качестве антигена, если она содержит вируса не менее 105 ЭИДзо/млАГ сохраняют в замороженном состоянии. Предложена следующая методика концентрации и очистки вируса вируссодержащий материал концентрируют полиэтиленгликолем с молм 6000, конечная концентрация его в вирусосодержащей суспензии должна быть равна 7% Концентрирование ведут при 4°С в течение 3 ч, центрифугируют концентрированный вирус при 3000об/мин. 30 мин. Инфекционная активность полученного вируса - 1 О6-107 ЭИД 50/мл

РН. Наиболее чувствительна по сравнению с РДП и РРИД. Она выявляет специфические AT у 96-98% инфицированных птиц независимо от формы течения заболевания. Однако эта реакция трудоемка и требует значительного количества КЭ. На КЭ или культурах клеток реакцию ставят по общепринятой методике, чаще используют модификацию посто­янная доза сыворотки и различные разведения вируса. Число рядов соответствует числу испытуемых сывороток плюс 2 ряда контроля (с нормальной и иммунной сыворотками), а число пробирок в ряду -числу разведении вируса. После контакта (1ч при комнатной тем­пературе) смесь сыворотки с каждым разведением вируса инокулируют не менее чем 4 КЭ на ХАО по0,2 мл. Эмбрионы инкубируют при 37°С в течение 6 дн. При вскрытии выявляют специфические изменения на ХАО. В РН рекомендуется использовать не разведенные сыворотки. Оценку результатов проводят по индексу нейтрализации. Сыворотку с ИН10 или меньше, считают отрицательной, а с индексом больше 10 – положительной.

РДП. Проводят по общепринятой методике, используя стандартный АГ Эта реакция может выявить 25-50% переболевших птиц. Однако простая техника постановки ее и быстрое получение результатов дают возможность с минимальными затратами средств и времени обследовать большое количество птицы. Специфический антиген готовят из вакцинно­го вируса ИЛТ клона НТ. Вируссодержашую суспензию - центрифугат гомогенизированных ХАО - концентрируют, используя 1%-ный раствор полиэтиленгликоля на дистиллированной воде, либо полиэтиленгликоль (ПЭГ-6000) при добавлении в суспензию из расчета 7%.

Антисыворотку к вирусу ИЛТ получают гипериммунизацией морских свинок и птиц. В первом случае используют концентрированный вирус ИЛТ ститром не ниже 108ЭИД5о/мл-, которым иммунизируют морских свинок по следующей схеме: первая иммунизация в объе­ме 0,1 мл внутрикожно в плантарную поверхность обеих лапок, вторая иммунизация - через 7-9 дн в объеме 1 мл подкожно в область верхней губы; последующие 2 инъекции - через 14-16 и 21-23 дн после второй проводят аналогично. Через 10 дн после последнего введения АГ морских свинок тотально обескровливают. Уровень AT в РДП составлял, как правило, 1 16 и выше,в лиофилизированном состоянии сыворотки сохраняли свою активность 2 г.

Птиц (молодок и петухов в возрасте 90-120 дн) гипериммунизируют по схеме: первый и второй раз (через 2 дн) иммунизируют специфическим АГ внутривенно в объеме 1 мл, тре­тий раз через 16 дн и четвертый раз через 30 дн -проводят интратрахеально в таком же объ­еме. Через 15 дн после последней иммунизации берут пробу крови и исследуют на актив­ность и специфичность. Если активность сыворотки в РДП со специфическим АГ 1:32 и выше,то у такой птицы тотально (из сердца) берут кровь, сыворотку от которой лиофилизируют и используют для выявления AT в органах и тканях больных и погибших птиц. Если титр специфических ПА в пробе сыворотки окажется ниже чем 1:32, то птицу им­мунизируют еще раз вирулентным вирусом ИЛТ в разведении 1:100 интратрахеально в объ­еме 0,5 мл. Через 10-12 дн птиц обескровливают и сыворотку лиофилизируют.

В качестве растворителя для приготовления геля используют 0,1М забуференный физ-раствор NaCl pH 7,2-7,4; забуференный фосфатный раствор состоит из 9 частей ОД5М рас­твора NaCl и 1 ной части 0,15М фосфатного буфера срН 7,2 по Сервису, веронал-ацетатный буфер с рН 8,6 с ионной силой 0,1 иборатный буфер рН 8,4-8,6. Гель на этих буферных рас­творах готовят из расчета:1,5 гагара на 100 мл растворителя. Растворяют агар в течение 1,5-2 ч в кипящей водяной бане, добавляя в расплавленный агар консервант (риванол, азид натрия идр.). Горячий агар разливают по 3 мл на предметные стенки или по 35 мл в чашки Петри, расположенные строго горизонтально. Как только агар затвердеет,пластинки можно использовать в РДП. Таким образом, для диагностики ИЛТ рекомендуется РДП на ага­ровом геле, приготовленном на боратном, либо фосфатном буферных растворах. РДП при­годно для выявления специфических AT в крови больных и переболевших птиц, а также ви­русного АГ ИЛТ в органах погибших птиц.Разработаны условия получения специфического вируса ИЛТ, активность его РДП 1:4-1:32, а в твердофазном ИФА 1:265-1:4000.

ELISA. Оказался более чувствительным, чем РН, по чувствительности приближается к ИФ У отдельных экспериментально зараженных цыплят с помощью ELISA и РИФ удава­лось выявить AT в более ранние сроки, чем в РН. Разработан твердофазный ИФА для выяв­ления специфических AT к вирусу ИЛТ в сыворотках крови вакцинированных птиц. Мето­дом шахматного титрования была выработана сенсибилизирующая доза антигенов и разве­дения иммунопероксидазного конъюгата. В ИФА можно выявлять специфические антитела в титрах 1:100-1:200 в сыворотках крови вакцинированных птиц. Аналогичные титры в РН и РДП соответственно составляли 1:8-1:32 и 1:2-1:16 (12). ELISA и РН (микрометод) успешно применяли для обнаружения AT в стадах с субклиническим течением ИЛТ. Обнаружить Поствакцинальные AT к вирусу болезни в сыворотках цыплят с помощью ELISA уда­ется через неделю после вакцинации. Также предложен усовершенствованный метод ELISAпутем введения в реакцию авидин-биотин-ферментного комплекса. Он пригоден и для оценки поствакцинального иммунитета .

Дифференциальная диагностика. При постановке диагноза на ИЛТ необходимо исключить НБ, оспу, ИБК, заразный насморк, хронический пастереллез, респираторный микоплазмоз и др.

Иммунитет.  Заболевание сопровождается длительным или пожизненным вирусоносительством. Из трахеи переболевших птиц вирус выделяли в течение 2 лет. Смывы с трахеи обладали вирус нейтрализующей активностью на 7-8-й дн после заражения. При ИЛТ установлено важное значение клеточного иммунитета. Иммуногенность вакцины зависит от ее реактогенности, отмечена тесная корреляция между напряженностью иммунитета и титром ВНА (в культуре клеток почки КЭ). В ряде случаев иммунитет наступал раньше, чем появлялись гуморальные AT. Формирование ВНА и гиперчувствительность замедленного типа не коррелирует с напряженностью иммунитета у вакцинированной птицы.

В Российской Федерации и странах СНГ применяют сухую вирус-вакцину из шт ЦНИИПП. Ими предложен метод иммуни­зации - втирание вакцины в слизистую оболочку верхнего свода клоаки. Иммунитет насту­пает через 7-10 дней и сохраняется у большинства птиц в течение всего срока их использова­ния. Разработан и аэрозольный метод вакцинации данным препаратом. Предложена также живая вирус вакцина из природно-ослабленного штамма  ВНИИБП, кото­рую можно применять путем втирания в слизистую оболочку клоаки и аэрозольно. При использовании этого штамма с ГА активностью 1 128-1 512 нанесением его на конъюнктиву в дозе 1000 ЭИДзо достигался высокий эффект, который оценивался по уровню анти ГА вРЗГА Сероконверсия не менее 80% и среднегеометрический титр AT более 4 log свиде­тельствуют о напряженном иммунитете.

Помимо живых культуральных вакцин, в Японии применяется клеточно-ассоциированная живая вакцина из вируса ларинготрахеита СЕ в вирусинфицированных клетках ко­торой содержится значительно больше вирусспецифических белков, чем в свободных вирионах. Иммунитет у привитой птицы развивался на 6-й день после иммунизации. Да­же в 10-кратной дозе вакцина оказалась безопасной для цыплят.

Предложена также живая вакцина против ИЛТ и болезни Марека,которая индуцирова­ла иммунитет к обоим вирусам при подкожном и внутримышечном введениях. Показа­на эффективность одновременной вакцинации цыплят против НБ иИЛТ Оказалось, что вакцинный штамм Ла-Сота не оказывает тормозящего влияния нарепродукцию шт ВНИИБП вируса ИЛТ в КЭ. Биологическая активность ииммуногенность вирусвакцины ИЛТ кур из клона НТ не изменялась при хранении ее в течение 12 мес при температуре 2-6°С.

Предпочтительный метод иммунизации - закапывание вакцины на конъюнктиву или применение ее в виде аэрозоля Вакцинация аэрозолем, содержащим вакцинный вирус, мо­жет сопровождаться нежелательными последствиями особенно при наличии в хозяйстве микоплазменной инфекции. При аэрозольной вакцинации иммунитет развивается через 4-5 дн и сохраняется до года. В настоящее время вРФ применяют вакцины ВНИИБП и ВНИИВВиМ Первая после двукратного аэрозольного применения (5-7,5 lg ЭИД 5о) создавала иммунитет у всех 5-6 - нед цыплят яичных стад и у 80% цыплят мясных пород кур. Через 4,5 мес после вакци­нации у 90% кур сохранялся напряженный иммунитет. Вакцину ВНИИВВиМ готовят из ат-тенуированного шт НТ, она менее реактогенна при аэрозольном применении. Несмотря на высокую биологическую активность и ареактогенность вакцины против ИЛТ из клона НТ, не рекомендуется использовать ее для вакцинации разновозрастных цыплят и там, где нет необходимых условий для создания нужной ее концентрации в птичнике. Вакцина Против ИЛТ из клона НТ при клоачном методе применения в дозе 11240 ЭИД 5о и выше форми­рует у 30-40 дн цыплят напряженный иммунитет после однократной вакцинации.

Относительно эффективности инактивированной вакцины в литературе имеются проти­воречивые данные Для изготовления инактивированного препарата используют р-пропилактон, этилэнимин, формалин. Однократная Иммунизация цыплят инактивированной эмульсин-вакциной сообщает устойчивость цыплят к заражению в течение 12 мес. Таким образом, получена эффективная инактивированная вакцина, которую рекомендовано применять в хозяйствах с частыми вспышками ИЛТ .

Генно-инженерные вакцины. Независимо от методов аппликации живой вирус-вакцины у птицы наблюдается довольно длительное носительство вакцинного вируса. Аттенуированные вакцины могут быть причиной возникновения латентной формы инфекции. Разрабаты­ваемые генно-инженерные вакцины лишены этого недостатка. В сочетании с гигиенически­ми мероприятиями такие вакцины могли бы привести к искоренению ИЛТ к 2000г. в пти­цеводческих хозяйствах.Описаны методы конструирования мутантов вируса ИЛТ, у которых ген ТК (тимидинкиназы) инактивирован мутациями разного типа: делециями (например участка ДНК между 2 сайтами Narl), вставками чужеродной ДНК или делецией и вставкой. Эти мутанты не продуцируют функциональную ТК и являются аттенуиро-ванными. В ген ТК вируса ИЛТ можно встраивать гетерологичные гены,кодирующие АГ патогенов птиц: вирусов БМ, НБ, ИБК, ретровирусов и т.д. Такие Варианты вируса ИЛТ можно использовать в качестве вакцинных векторов,индуцирующих иммунный ответ. Получен положительный результат при использование для специфической профи­лактики ИЛТ очищенного афинной хроматографией гликопротеина.

Оценка поствакцинального иммунитета. Куры, переболевшие инфекционным ларинготрахеитом, в естественных условиях приобретают практически пожизненный иммунитет. Установлено, что двукратная ассоциированная аэрозольная иммунизация птиц против НБ, ИЛТ и оспы не угнетает клеточных и гуморальных показателей иммунитета. Большинство исследователей поствакцинальный иммунитет оценивают по уровню ВНА, а напряженность - путем контрольного заражения.Установлена тесная корреляция между напряженностью иммунитета и титром в первые 2 недели после вакцинации. В ряде случаев цыплята могут быть устойчивы к заражению, но серонегативны, что свидетельствует о том, что иммунное состояние наступает раньше, чем появляются AT в крови.

В сыворотках крови вакцинированных кур на 10-14-й дн обнаруживают ВНА. В небольших титрах они у птиц выявлялись в РН через 55 нед после вакцинации. Установлена прямая зависимость между уровнем защиты кур после вакцинации и титрами ВНА. При титре поствакцинальньгх антител Г 76, Мб, 1:10и Г8 процент заболеваемости птицы после экспериментального заражения составлял 0,45, 55 и 100% соответственно. Птица, иммуни­зированная клоачно, не заболевает при интратрахеальном заражении, а выжившая после интратрахеальной вакцинация остается невосприимчивой при заражении в клоаку. В связи с этим поствакцинальный иммунитет оценивают по наличию ВНА в сыворотке крови вакцинированных кур, а также по результатам биопробы (клоачная реакция). Для ориентировоч­ной оценки напряженности иммунитета птиц после вакцинации против ИЛТ можно использовать РДП и РИЭФ, но они менее показательны. Связь титров AT с вирусоносительством и вирусовыделением не изучена.

Пассивный иммунитет. Заражение 1-дневных цыплят, полученных от вакцинирован­ных птиц, приводило к 40%-ной заболеваемости и смертности; гибель цыплят, полученных от не иммунных родителей, составляла 100%. Куры,содержащие ВНА в титре 1:76 не защищают потомство и в организме их возможна репродукция вируса в раннем возрасте.

 

Ветеринарная Консультация тел.8-809-505-95-95

Посоветуйся с Ветеринарной Энциклопедией
Криодеструкция - прививка против рака

Лечение опухолей без операции и наркоза
DOGSAUNA

Супертёплый дом-термос для Вашей собаки!


Инфекционный ларинготрахеит птиц - болезни животных. Описание, характеристика, отзывы, рекомендации, обсуждение, смотреть, скачать.
Определение, этиология, патогенез, клинические признаки, симптомы, осложнения, патологоанатомические изменения, диагноз, дифференциальный диагноз, лечение, профилактика и меры борьбы.
Комментарии через социальные сети - вконтакте, одноклассники, facebook, twitter и др.



Разделы:


Консультация ветеринара по телефону

comments powered by HyperComments


© Ветеринарная энциклопедия - работаем для Вас с 2006 года!

Вся информация взята из открытых источников или является результатом авторской работы коллектива
Ветеринарной Интернет Энциклопедии webvet.ru и приведена для ознакомительного использования. За её применение ресурс ответственности не несёт.


Яндекс.Метрика