Репродуктивный и респираторный синдром свиней (РРСС)

 Репродуктивный и респираторный синдром свиней
(РРСС, "синее ухо, голубой аборт",эпизоотический поздний аборт свиней) -это  вирусное контагиозное заболевание главным обра­зом свиноматок, характеризующееся абортами, наличием мертворожденных поросят, преждевременными опоросами или задержкой опороса, респираторными нарушениями, появлением окрашивания кожи ушей и других органов.
С 1987 г. во многих свиноводческих хозяйствах США и Канады регистрируется патоло­гия воспроизводства свиней, характеризующаяся поздними абортами, рождением мертвых,нежизнеспособных или уродливых поросят и поражением органов дыхания. РРСС вызывается артеривирусом.
Забо­левание появилось в конце 1980-х гг. в Северной Америке, затем в Европе.
В настоящее вре­мя РРСС является эндемичным для многих регионов мира.
Болезнь отличается большим раз­нообразием признаков,определяемых во многом общим состоянием здоровья животного.
При интродукции внеинфицированное стадо инфекция причиняет большой экономический ущерб, но скоро переходит в умеренную или даже инаппарантную форму.
В эндемичной форме вирус продолжает долгое время циркулировать в стаде. В течение многих недель персистирует виремия.
Вирус предрасположен к макрофагам и не размножается в большинстве клеточных линий, отличается чрезвычайной генетической и АГ-вариабельностью.
Первоначально это заболевание получило название "таинственная болезнь свиней"
В 1991 г. были опубликованы сообщения о появлении аналогичного заболевания свиней в стра­нах Европы. При этом ученым из Центрального ветеринарного института в Нидерландах был выделен новый вирус, который назвали «вирус Лелейстад».
Вирус Лелейстад это РНК-содержащий,оболочечный вирус, отнесен к роду артеривирусов.
Для исключения разночтения этой болезни в различных странах мира, сессия МЭБ (апрель 1991 г.) и 2-й Ме­ждународный симпозиум в США (1992 г.)приняли единое название - репродуктивный респи­раторный синдром свиней (РРСС),или PRRS в латинской транскрипции.

Распространение болезни
В настоящее время можно говорить о панзоотии РРСС, хотя многое еще не известно о ее мировом распространении.
Многие страны не могут лабораторно диагностировать болезнь или не хотят сообщать о ее появлении.
На американском континенте о болезни сообщали США и Канада. В США существуют четкие статистические данные по болезни.
Имеются данные о ее наличии в 19 штатах. Моррисони с сотр. сообщили о ретроспективном выявлении 364 стад животных , положительно реаги­рующих на РРСС на основании серологических исследований только в 7-ми свиноводческих штатах (Айова,Иллинойс, Индиана, Мичиган, Небраска и Северная Каролина).
В Канаде со­общения подтверждены серологически в 2-х штатах: Онтарио и Квебек.
В Европе наибольшее распространение болезни отмечали в свиноводческом поясе, охватываю­щем западные земли Германии, Нидерланды и Бельгию.
В Бельгии наибольшее количество вспышек болезни регистрировали в апреле 1991 г.
В свиноводческих хозяйствах Франции РРСС - новое заболевание, вызываемое у свиней новым вирусом. Проявляется разнообразной симтоматологией и сопровождается абортами, мертворождением и гибелью поросят, а также гриппоподобными проявлениями. Во Франции РРСС регистрировали на 169 племен­ных фермах в период с ноября 1991 г. по май 1992 г., главным образом, в провинции Бретань.
В Англии болезнь появилась в мае 1991 г. и широко распространилась в графствах Хамберсайд и Северном Йоркшире, а в последующем и в Шотландии.
Болезнь регистрирова­лась также в Дании, Испании, Голландии и нао. Мальта обнаружены специфиче­ские AT к возбудителю в пробах крови свиней,поступившей в диагностические центры Евро­пы из Италии и Польши.

Сведения о возбудителе
Голландским ученым Wensvoort и Terpstra (Центральный ветеринарного института г Лелистад) удалось установить истинную этиологическую природу этой болезни, выделив вирус, названный ими "агент Лелистад",в культурах легочных макрофагов свиней.
В на­стоящее время установлено, что возбудителем болезни является РНК-содержащий вирус, ко­торый входит в род артеривирусов.

Морфология и химический состав
Возбудитель болезни -РНК-содержащий вирус раз­мером 45-65 нм. Он имеет наружную оболочку и чувствителен к липидным растворителям. По физико-химическим свойствам напоминает представителей семейства тогавирусов, рода артеривирусов (вирус артериита лошадей). Вирусы РРСС, выделенные в Европе (агент Лелистад) и в США (VR-2332),несколько от­личаются по биологическим свойствам, хотя и имеют перекрестные серологические связи.

В культурах легочных макрофагов вирус РРСС вызывает ЦПИ в виде округления клеток с последующим пикнозом и отделением от монослоя в течение 2-4 сут.
Вирус содержит РНК и оболочку, способен реплицироваться в макрофагах и проходить через плаценту, зара­жая плод, может длительно персистировать в организме животного и вызывать повторно иммуносупрессию.
Передается при прямом контакте и респираторно. Быстро распространялся на фермах.
Вирус РРСС проникает трансплацентарно, на что указывает обнаружение возбудителя и специфических AT у мертворожденных плодов и живых ослабленных поросят до первого приема молозива. Plagemann (1992) предполагает, что вирус РРСС относится к новой груп­пе вирусов, напоминающих тоговирусы, но имеющую положительно закрученную РНК и по структуре сходных с корона- и торовирусами.

Устойчивость.
Вирус чувствителен к изменению рН среды.Оптимум рН от 5 до 7.
Benfield et Welson (1992) сообщали, что вирус SIRS,выделенный в США, сохраняет инфекционность в гомогенатах пораженных легких при-70°С в течение 1,5 лет, при +4°С - 1 мес, при 37°С - 2-х сут.
При температуре 55°С он инактивируется в течение 45 мин. Friey et.al. (1992) выделили вирус из патматериала, хранившегося в течение 3-х лет в замороженном состоянии.

AT свойства.
Обследовано 4 свиноводческие фермы на наличие ATк вирусу РРСС с по­мощью ИФА в течение 12 нед после опороса.
Титр AT у свиноматок сопоставляли с титром материнских AT у поросят в возрасте 2 нед.Материнские AT, выявляли у поросят в течение 4-10 нед. ВНА обнаружили через 12 дней после заражения или 18 дней после контакта с больны­ми животными.
Максимальных титров они достигали на 40-50-е сутки после заражения и сохранялись до 120 дней (срок наблюдений).

Культивирование.
Вирус РРСС успешно репродуцируется в легочных альвеолярных макрофагах (АМФ) поросят.
Для получения АМФ используют 4-6-нед поросят, свободных от патогенной микрофлоры ферм. АМФ выделяли 2-кратным промыванием отпрепарированных и изолированных легких забуференным физраствором, содержащим антибиотики (пеницил­лин, стрептомицин, неомицин и амфотерицин), который нагнетали через трахею с помощью автоматического шприца с иглой (около 500 мл).
Выбор жидкости из легких, содержащей АМФ, проводят обычно шприцами через то же отверстие.
Суспензию клеток из легких цен­трифугировали при 1500 обор. - 15 мин. При наличии эритроцитов к осадку добавляли 0,83%-ный р-р хлорида аммония и после 5-мин инкубации при комнатной температуре клетки вновь центрифугируют при тех же условиях.
Заражение вирусом РРСС проводили через 2-24 ч по­сле 2-кратной отмывки питательной средой и антибиотиками.
Учет цитотоксического дейст­вия вируса проводят через 24, 48, 72, 96 и 120 ч. Культуральную жидкость используют в ка­честве AT ELISA. Титр макрофагального вируса составлял 1:8-1:16.
Таким образом, АМФ могут быть использованы для препаративной наработки вируса в исследовательских целях, изготовления диагностикумов и обнаружения вируса в патологических материалах.
Чувствительными к вирусу РРСС являются первичная культура АМФ свиней и клон клеток MARC-145 (клоновый вариант, полученный из переви­ваемой культуры клеток МА-104 почки африканской зеленой мартышки). Максимальное на­копление вируса отмечали при посевной концентрации 100-120 тыс. клеток/1 мл с использо­ванием фетальной сыворотки и снятия мо­нослоя не позднее 3-4-х сут.

Клинические признаки и патологоанатомические изменения.
У свиноматок болезнь начинается с временного отказа от корма или худшей его поедаемости.
В период абортов от­мечают как повышенную до 41,5°С, так и пониженную температуру тела.
У отдельных жи­вотных наблюдают респираторные нарушения и у 1-5% - голубовато-красное окрашивание кожи ушей, пятачка и вульвы. Существенным признаком заболевания супоросных свиноматок периода,близкого к опоросу, являются аборты и преждевременные опоросы, возникающие через 2-3 нед после обнаружения первых симптомов болезни.
По данным английских ученых, пораженные свиньи на первой стадии болезни проявляют признаки инфлюэнцы, в частности, высокую температуру тела и тяжелое дыхание. Позднее ярко-красные пятна появляются по всему телу свиньи.
Спустя некоторое время окраска пятен изменяется, и они приобретают си­ний цвет.
В первые 2 нед болезни аборты могут составлять 60-70%, через 3 нед - 50 и через 18 нед - 10%. В естественных условиях клиника может значительно варьировать от стада к стаду и не коррелировать с основной тяжестью репродуктивных нарушений.
В от­дельных хозяйствах количество абортировавших свиней на последней стадии супоросности достигает 100%.

При анализе 214 пораженных хозяйств в округе Мюнстерленд в Германии установлено, что 37% абортов произошло на 100-112 дни, 49% -на 113 дни 14% - на 117-120 дни супорос­ности.
Если рассматривать крайние пределы нормальной супоросности в 113-117 дней, то запоздалые опоросы до 120 дней могут свидетельствовать о гибели плодов в более раннем пе­риоде,обусловленных другими инфекциями свиней с репродуктивным синдромом, такими как парвовирусная или энтеровирусная.
Однако, как правило, мумификации плодов при ост­ром течении РРСС не наблюдается.
В отдельных случаях у свиноматок наблюдали залежива­ние, шаткую походку, паралич задних конечностей или косую постановку головы. Гибель свиноматок не превышает 2%.
После абортов свиноматки довольно быстро выздоравливают и только у отдельных из них отмечали "послеродовые схватки".
Свиноматки повторно приходят в охоту, однако сообщается об удлиненном сроке холостого периода.
У свиноматок, опоро­сившихся в оптимальные сроки супоросности (114,7±1,7 дн) в остром периоде болезни до 100% поросят могут быть мертворожденными.
Немецкие авторы, обработав большое количество статистических показателей поражен­ных хозяйств, установили, что от больных свиноматок в пометах насчитывали 30-40% мер­творожденных, 30% слабых и 30% внешне здоровых поросят.
У мертворожденных поросят наблюдали выпуклообразную форму головы, конъюнктивиты и поражение роговицы глаз, подкожные отеки. Слабые поросята массой до 1 кг издают ужасающий визг и стенания, задние конечности их часто вытянутые, и они не могут нормально встать на ноги.
При хроническом течении наблюдают относительное благополучие супоросных маток. Спустя 1-1,5 месяца возможно рождение на неблагополучной ферме здоровых поросят, но через некото­рое время вновь отмечают аборты.
В откормочных хозяйствах болезнь протекает с рядом особенностей: основные клинические признаки связаны с поражением органов дыхания.

При вскрытии наблюдают кровоизлияния и отеки подкожной клетчатки, увеличенное со­держание жидкости в перикардиальной и брюшной полостях, дистрофию печени и изменения в легких. Они кровенаполнены и чаще имеют мозаичную окраску.
Слаборазвитые поросята, как правило, гибнут в первые недели жизни.
Через 4-6 нед заболевание начинает приобретает хроническое течение; наблюдается задержка роста и развития, а также повышенная чувстви­тельность к секундарным инфекциям.
У отдельных животных отмечали негнойные энцефали­ты и миокардиты. Правда, у большинства поросят их не обнаруживали.
В целом патолого анатомические признаки не характерны и напоминают таковые при бактериальных инфекциях.
У маток с поражением ушей признаков миокардита не отмечали.
У больных животных в США процент поражения сердечной мышцы значительно выше, чем в Германии.
Нередко болезнь протекала в смешанной форме,одновременно с гриппом, БА, парвовирусной инфекцией.

Экспериментальная инфекция
Terpstra и др.. (1991) проводили опыты по заражению культуральным вирусом РРСС 8-ми свиноматок на 84-й дн супоросности.
Только у 2-х свиноматок наблюдали 1-дн повышение температуры тела до 39,6°С. У 2-х - покраснение ко­жи ушей и учащенное дыхание. Одна свиноматка абортировала на 10-й дней супоросности и принесла 7 мертвых и 4 живых слаборазвитых поросят. Две другие опоросились на 116-й и 117-й дн супоросности и в пометах обнаружили 10 живых и 19 мертворожденных поросят, из которых 5 были мумифицированными Оставшиеся 5 свиноматок опоросились на 113-115-и дн супоросности без репродуктивных нарушений. В пометах было 58 поросят, многие из ко­торых были слаборазвитыми и 26 из них (40%) пали в течение 1-й нед жизни Вирус РРСС был выделен от 31 поросенка (30% инфицированности).
При интратрахеальном и внутримышечном заражениях на 2-5-е сут у инфицированных подсвинков отмечалось незначительное (на 0,5-1,5°С) повышение температуры тела.У 2-х животных на 10-12-й день после заражения отмечен кашель. Других клинических признаков болезни не выявлено.
Повышение количества лейкоцитов в крови было установлено через су­тки после заражения животных и к 4-му дню их уровень достигал 28-30 тыс/мл и сохранялся в течение 2-3 нед. У подсвинка,находившегося в контакте с зараженными животными, по­вышение температуры тела отмечено на 18-19-е, а увеличение числа лейкоцитов на 6-е сутки после совместного содержания. На 5 и 14 день после заражения было убито по одному животному.
При патологоанатомическом исследовании у них отмечали единичные очажки острой бронхопневмонии. В обоих случаях из легких и легочных альвеолярных макрофагов выделен вирус РРСС. В остальных внутренних органах подопытных животных видимых из­менений не обнаружено. При интраназальном заражении вирус содержащей суспензией поросят 4-нед возраста температура тела их повышалась до 40,5°С, удерживаясь на этом уровне 3 дн, отмечалось учащенное дыхание, отказ от корма и общее угнетение.
Подкожное и внутримышечное введе­ние вируссодержащего материала не вызывало у взрослых белых мышей никакой видимой реакции. Однако та же суспензия после внутримозгового введения белым мышам вызывала появление нервнопаралитических признаков и их гибель. С 3-го пассажа гибель мышей на­ступала через 24 ч Вирус № 9-181-93, адаптированный к белым мышам, вызывал специфи­ческое ЦПД.
В 1995 г. в Курской области был выделен вирус РРСС, кото­рый не вызывал ГА эритроцитов и Гад.
У животных, зараженных европейским стандартным шт "Лелистад" вируса РРСС клинических признаков не отмечалось.

Эпизоотологическая характеристика 
С эпизоотической точки зрения важен путь распространения инфекции.
В частности, в де­кабре 1990 г. болезнь зарегистрирована в Нидерландах. Свиноводство в этой стране - одно из наиболее концентрированных в мире, и естественно, болезнь очень быстро распространилась респираторным путём, весьма возможно, в потоках воздуха. Предположительно,факторами передачи возбудителя могли быть и птицы, а также люди и автомобили(если эти объекты были в контакте с инфекционным агентом).

Большинство сельскохозяйственных выставок и ярмарок по продаже свинопоголовья в 1991 г в Великобритании были запрещены.
По данным госветслужбы этой страны в настоя­щее время нет доказательств распространения болезни воздушным путём, и все случаи заноса возбудителя связаны с передвижением поросят.
Вирус может персистировать в заражённых стадах свиней до полугода. Это может быть связано с отсутствием сероконверсии у отдельных явно инфицированных животных.
Отдельные заражённые свиноматки могут быть источником заражения для здоровых животных в течение 99 дней.
Английские исследо­ватели считают, что стада свиней остаются заражёнными в течение 2-х месяцев после прекраще­ния появления явных клинических признаков болезни.
Отмеченное прямо связанно с производственными показателями поражённых РРСС пле­менных ферм свиней.
На небольших фермах на 50-200 свиноматок в период острого течения болезни недополучают более 50% поросят.

В нашей стране в 1991-1993 гг. в ряде хозяйств обнаружены массовые случаи абортов, рождение мёртвых и слабых поросят, респираторные расстройства.
В 1993 г.в Голландию были направлены 40 проб сывороток крови от свиноматок с нарушениями репродуктивной функции из 10 хозяйств для исследования на наличие AT к вирусу репродуктивного и респи­раторного синдрома. Во всех 10 обследованных хозяйствах обнаружены положительно реаги­рующие свиноматки.
Из 40 исследованных проб сывороток крови 38 оказались положитель­ными, причем большая часть сывороток(72,5%) содержала специфические AT в высоких титрах (1:640 и выше). Высокий процент положительных сывороток свидетельствует о широ­кой циркуляции вируса в исследуемых свиноводческих хозяйствах.
Вирус РРСС, вероятно, обладает иммунодепрессивными свойствами. Американскими ис­следователями установлено уменьшение числа альвеолярных макрофагов и нарушение их функции уинфицированных поросят.
Макрофаги играют важную роль в индукции AT обра­зования- они передают агент Т- и В-лимфоцитам.
Развитие респираторного синдрома,по-видимому, обусловлено вторичными бактериальными инфекциями после размножения вируса в альвеолярных макрофагах и нарушения иммунной системы лёгких.

Диагноз
на РРСС ставят на основании клинико-эпизоотологических данных и результатов лабораторных исследований.
Для выделения вируса используют сыворотку или плазму крови больных и павших поросят, пробы лёгких, селезёнки, плевральной и перикардиальной жидко­сти.
Выделение вируса проводят в культурах альвеолярных макрофагов, полученных от мо­лодых (6-8 недель) СПФ-поросят.
Успех голландских учёных и объясняется прежде всего тем, что они использовали эту культуру, в то время как культуры клеток РК-2, РК-15 и К-6 оказа­лись не чувствительными для выделения возбудителя.
Идентификацию возбудителя проводят по физико-химическими серологическим свойствам.
Из серологических методов используют вначале непрямой метод ИФ и прямой метод ИФА В США для идентификации возбудителя использовали РН, разработанную с этим вирусом в университете штата Миннесота, а также ИФ и ИФА, разработанные в национальной лаборатории Ames в шт. Айова.
Во Франции разработан непрямой метод ИФА для обнаружения специфических AT.
Сероконверсия в ди­агностических титрах (1:20 и выше) развивается к 14-му да после экспериментального инфицирования, а к 28-му дн титры антител накапливаются до 1:1280.
Разработана методика очистки и концентрирования культурального вируса РРСС, репродуцированного в культуре клеток МАРС-145 и FL.
Предварительно вируссодержащая суспензия очищается от балласт­ных белков низкоскоростным центрифугированием, затем концентрируется 2-кратным осаж­дением ПЭГ мол м. 6000 и очищается высокоскоростным центрифугированием (7000 мин-1 в течение 6 ч).
В градиенте плотности CsCl-сахарозы материал концентрировали в 100 раз. Очистка составляла 96,5%.
Все этапы подготовки препаратов контролировали по активности в ИФА.
Высоко специфичные активные препараты АГ вируса РРСС используют для изготов­ления AT диагностикумов для ИФА.
Метод непрямой ИФА более простой и его можно использовать в полевых условиях.
Достаточно исследовать из стада 10 проб сывороток, (лучше парных), чтобы суверенностью поставить лабораторный диагноз.

В Англии практикуется сбор из 12-15 пар сывороток от подозреваемого стада.
Служба диагностики на РРСС в этой стране действует с апреля 1992 г.  Исследовано уже 118 стад и было выявлено 31 стадо, положительно реагирующее на РРСС.
При серологиче­ском исследовании ложноположительные реакции, как правило,отсутствуют, хотя ложноотрицательные являются обычными и достигают 25%.
Benfieldet. al. (1992) сообщали об ис­пользовании монАТ в ИФ при идентификации европейских, американских и канадских штаммов возбудителя РРСС. В РФ разработан твердофазный ИФА, для проведения диагно­стики РРСС, составлены наборы диагностикумов для выявления РРСС и специфических AT.
МонАТ к вирусу РРСС могут быть использованы как для выявления АГ вируса РРСС в патологическом материале,так и для определения AT в сыворотках крови свиней, так как они дают более специфическую реакцию по сравнению с полиАТ.

При дифференциальной диагностике необходимо исключить вирусные и бактериальные болезни, протекающие с нарушениями в репродуктивных системах, а также отравления.
Ис­ключают прежде всего АЧС, КЧС, БА, грипп свиней, ЭМК, парвовирусную болезнь, ТГЭ, лептоспироз и хламидиоз.
Характерной особенностью этой болезни является обострение вто­ричных и хронически протекающих инфекций, возбудители которых могут скрытно циркули­ровать в пораженных стадах свиней. Это ещё более усложняет проведение лабораторной дифференциальной диагностики.

Иммунитет
После переболевания большая часть свиноматок оказываются иммунными к повторному инфицированию.
AT к вирусу РРСС, выявляемые в ИФА, могут персистировать в течение го­да.
При достаточно пессимистичном отношении к созданию средств специфической профилактики РРСС появляются предпосылки решения данного вопроса. Так выдан патент ЕРА 95200877.9 Akzo Nobel(Нидерланды) на европейские штаммы вируса репродуктивного рес­пираторного синдрома свиней, используемые для создания вакцин.
О механизме разви­тия иммунитета известно крайне мало. В Англии также ведется разработка вакцин.

Меры борьбы
Специфических средств лечения при РРСС нет.
Отсутствуют также сред­ства специфической профилактики.
Лабораторная диагностика болезни затруднена преж­де всего из-за необходимости проведения большого спектра дифференциальных диагности­ческих исследований. Поэтому при возникновении болезни в ранее благополучной стране не­обходимо принятие решений проблемы в национальном масштабе: полностью запретить вы­воз свиней, туш и навоза из подозрительных ферм и свинохозяйств; наложить ограничения по передвижению свинопоголовья в течение 8 нед после последнего случая выздоровления.
Свинопоголовье, предназначенное на экспорт, надо перевозить в специально оборудован­ных транспортных средствах.
Подозрительный инфицированный материал (плаценту, плоды и мертворождённых поросят) необходимо уничтожать.
Убирать, дезинфицировать помещения и места опороса свиноматок.
Обязательно должны быть дезинфицированы коврики на входе свиноводческих помещений.

Ветеринарно –санитарная оценка продукции в нашей стране не разработана.