Окрашивание препаратов

Окрашивание препаратов

1. Окраска по Граму

На мазок накладывают полоска фильтровальной бумаги и наливают на нее рабочий раствор генцианвиолета. Если есть готовые бумажки, пропитанные этой краской, то их кладут на мазки матовой стороной вверх и наливают несколько капель воды. Через две мин. Бумажки снимают, краску сливают (не промывают), а на препарат наносят раствор Люголя на 1 мин. (до почернения мазка), после чего раствор сливают, а мазок обесцвечивают этиловым спиртом до прекращения отхождения краски (около 30 сек.). Затем мазок промывают водой, и стряхнув воду, докрашивают мазок фуксином Пфейфера 30-60 сек. Или сафранином 2 мин.

!  Надо строго соблюдать определенные сроки препарата, особенно спиртом: при его передержке можно      обесцветить грамположительные микробы

Окрашивание капсул

2. Окраска по Романовскому-Гимзе

Фиксированный спиртом или жидкостью Никифорова препарат кладут мазком вниз в чашку Петри на подставки из спичечной или стеклянной соломки. Готовят рабочий раствор краски Романовского-Гимзы (15-20 капель на 10 мл. дистиллированной воды), перемешивают и подливают под препарат, следя за тем чтобы все мазки были полностью смочены краской. Через 15-20 мин. Препараты промывают водой и высушивают на воздухе. Под микроскопом тела бактерий темно-синие, капсулы розовые

3. Окраска по Ребигеру

Не фиксированные мазки окрашивают (и одновременно фиксируют) формалинизированным генцианвиолетом 15-20 сек., быстро промывают водой и подсушивают. Бактерии густо-фиолетовые, капсулы красновато-фиолетовые.

4. Окраска по Ольту

Для окрашивания готовят свежий 2 %-ный водный раствор сафранина. Краситель растворяют в горячей воде и фильтруют при подогревании. Мазки красят 1-3 мин., промывают и высушивают. Бациллы – коричневые, капсулы бледно-желтые.

5. Окраска по Михину

Дает хорошие результаты только при наличии старой синьки Леффлера, способной за счет образования азура давать разноцветное окрашивание тел и капсул микробов. Мазок красят синькой 3-5 мин., быстро споласкивают малым количеством воды и быстро подсушивают. Тела бактерий синие, капсулы розовые

Окрашивание бруцелл.

6. Окрашивание по Ольту

Мазок фиксируют над пламенем, окрашивают 2 %-ным свежеприготовленным водным раствором сафранина при подогревании 2 мин., промывают водой, докрашивают без подогрева 0,75-1 %-ным растворм малахитовой зелени в течении1 мин., промывают и высушивают. Бруцеллы из молодых культур красные, другие микроорганизмы зеленые. В более старых культурах бруцеллы красятся в оба цвета и промежуточно.

7. Окраска по Шуляку-Шину 

 На фиксированный мазок наливают фуксин Циля в разведении 1:5, выдерживают 2 мин. Без подогревания и промывают водой; докрашивают 2 %-ным водным раствором метиленовой сини 5 мин. и промывают водой. Бруцеллы ярко-красные, остальные бактерии сине-голубые.

Окрашивание кислотоустойчивых микробов

8. Окраска по Цилю-Нильсену

 Мазок фиксируют над пламенем, накрывают полосой фильтровальной бумаги, наливают на нее карболовый фуксин Циля и нагревают с появлением паров 3-5 мин., периодически проводя стекло над пламенем, но не доводя до кипения; при этом надо доливать краску на мазок. Препарату дают остыть, удаляют бумажку, промывают водой; обесцвечивают 5 %-ным раствором серной кислоты 15-20 сек. затем этиловым спиртом 5-10 сек. промывают водой; докрашивают синькой Леффлера 3-5 мин. и смыв краску, подсушивают препарат. Микобактерии ярко-красные, все прочие бактерии синие.

Окрашивание анаэробов 

9. Окраска по Шоу-Муромцеву

 Мазки из органов и культур фиксируют смесью 1:4 формалина и этилового спирта 5-10 мин., не давая им испариться (доливая свежий раствор). После высушивания на воздухе окрашивают фуксин-синькой через полоски фильтровальной бумаги 20-30 сек., промывают водой и подсушивают. Бактерии и клетки тканей голубовато-синие, капсулы красные, фон мазка розовый.